“这条肽到底是没合成出来，还是合成出来了我没看见？”

——这是每一个做多肽的人，都会反复问自己的问题。

多肽合成最折磨人的地方，从来不是操作难，而是失败之后不知道该从哪一步查起。

• 树脂拆了

• 合成跑完了

• 裂解也做了

• HPLC 一跑，心直接凉半截

然后开始陷入循环：

“是不是树脂不行？”
“是不是偶联时间不够？”
“要不要整个流程重来一遍？”

但现实是：80% 的失败，其实从结果上就已经暴露了问题位置。而是按“失败结果长什么样”来倒推原因。

多肽失败不是随机的

很多人对多肽合成失败的认知是：

“玄学”“运气不好”“这条肽天生难做”

但从技术角度看，多肽失败几乎都符合一个规律：

不同阶段出的问题，会留下非常稳定的“结果特征”。

你只要学会看这几个信号，
就能快速判断：

• 是偶联问题

• 还是脱保护问题

• 还是裂解 / 纯化阶段的问题

第一类结果：HPLC 基本没有主峰（或只有一堆小峰）

这是最让人绝望的一种情况。

 典型表现

• 没有明显目标峰

• 全是低强度杂峰

• 重复进样结果相似

很多人看到这里，会直接下结论：

“没合成出来。”但这一步千万别急着认输。

这种结果，最可能的问题在哪？

高概率出在：早期偶联或脱保护阶段

原因很简单：

• 如果肽链在前期就“断了”

• 后面再怎么跑流程

• 都只是在延伸错误的起点

重点排查清单

经验判断：
如果连短杂峰都分布得很均匀，说明不是后期问题，而是“链根本没长起来”。

第二类结果：有主峰，但纯度始终上不去（70% 卡死）

这是最常见、也是最容易被误判的一类失败。

 典型表现

• 有一个看起来像目标的主峰

• 但旁边永远跟着一堆小峰

• 怎么纯化都只能到 60–75%

真正的原因是什么？

几乎可以直接指向：偶联不完全的“历史遗留问题”

注意一句话：

后期的杂峰，往往是前期欠下的债。

这些小峰通常是：

• 少一个氨基酸

• 多一个保护基

• 序列极其相似

它们和目标肽极难分开。

 哪些序列最容易出现这种问题？

重要判断技巧：
如果每次纯化的“杂峰比例非常稳定”，
那基本可以确定——
不是纯化问题，而是合成本身的问题。

四、第三类结果：主峰存在，但得率极低（像被“吃掉”了一样）

这类失败，很多新手会直接怪到：“裂解把肽弄坏了？”但实际情况要更细分。

典型表现

• HPLC 看得到目标峰

• 但量非常小

• 回收后几乎没多少粉

三种常见原因对照

情况一：裂解条件不合适

• 肽链被部分破坏

• 尤其是含 Cys / Met / Trp 的序列

情况二：纯化过程损失严重

• 上样过稀

• 梯度不合理

• 目标峰被“切掉一部分”

情况三：树脂负载与目标量不匹配

• 树脂负载低

• 合成量预期过高

 快速判断方法

五、第四类结果：同一条肽，每次结果都不一样

这是自动合成、高通量合成中最容易出现的异常。

 表现特征

• 同一序列

• 同一流程

• 不同批次纯度波动很大

 高概率问题点

脱保护或清洗步骤稳定性不足

尤其常见于：

• DMF 含水量变化

• 脱保护试剂老化

• 自动程序时间与实际不匹配

 一句话总结：
这不是序列问题，是“系统稳定性问题”。

六、从结果反推问题的速查表（非常实用）

七、为什么“重做一遍”往往解决不了问题？

因为大多数人重做时：

• 流程没变

• 参数没变

• 判断逻辑也没变

本质上只是：

用同样的方法，重复同一个错误。

真正有效的做法是：

先定位，再针对性修改一小步。

真正成熟的多肽研究员，很少问：

“流程该不该改？”他们更常问的是：

“这个结果，说明哪一步已经失败了？”

多肽合成不是赌运气，而是一门高度可排错的技术。只要你开始学会——从结果读信息，而不是从流程背步骤，

失败次数一定会明显下降。